Bu Immunohistochemical Staining Tampon Nasıl Yapılır
Fosfat tamponlu salin (PBS), immünhistokimyasal (IHC) boyama için yaygın olarak kullanılan ve çoğunlukla biyolojik araştırmalarda kullanılan bir tampon çözeltidir. PBS sodyum hidrojen fosfat, sodyum klorür ve bazı durumlarda potasyum klorür ve potasyum dihidrojen fosfat içeren su bazlı bir tuz çözeltisidir.
İmmünhistokimyasal boyama
İmmünohistokimya, bir doku bölümünün hücrelerindeki proteinler gibi antijenlerin, özellikle biyolojik dokularda antijenlere bağlanan antikorların ilkesi kullanılarak saptanması sürecini ifade eder.
İmmünofloresan boyama ilk immünohistokimyasal boyama yöntemiydi.
Antijenler, bir antijen-antikor bağlama reaksiyonu nedeniyle floresan boyalar kullanılarak antikorlar ile konjuge edildiğinde görünür hale gelir. Bu işlem, bir floresan mikroskobu altında belirli bir dalga boyunun heyecan verici ışığı ile aktive edildiğinde ortaya çıkar.
Solüsyonların ozmolaritesi ve iyon konsantrasyonları insan vücudununkiyle uyuşur - izotoniktirler.
PBS için bir reçete
PBS'yi çeşitli yollarla hazırlayabilirsiniz. Birden çok formül var. Bazıları potasyum içermezken, diğerleri kalsiyum veya magnezyum içerir .
Bu tarif nispeten kolaydır. 10X PBS stok çözeltisi (0.1M) için. Bununla birlikte, 1X'lik bir stok çözümü yapabilir veya bu 10X tarifiyle başlayabilir ve 1X'e kadar seyreltin.
Tüm süreç yaklaşık 10 dakika sürmektedir.
Tween ekleme seçeneği de sağlanmıştır.
PBS Tampon Yapmaya Ne İhtiyacınız Var
- Sodyum fosfat monobazik (susuz)
- Sodyum fosfat dibazik (susuz)
- Sodyum klorit
- Ölçek ve tartım tekneleri
- Manyetik karıştırıcı ve karıştırıcı çubuk
- PH'ı ayarlamak için kalibre edilmiş ve uygun çözümler sunan bir pH probu
- 1L volümetrik şişesi
- Tween 20 (isteğe bağlı)
Fosfat Tamponlu Tuzlu (PBS) Nasıl Yapılır
10.9 g susuz sodyum fosfat dibazik (Na2HP04), 3.2 g susuz sodyum fosfat monobazik (NaH2P04) ve 90 g sodyum klorür (NaCl) tartılır.
1L damıtılmış suyun hemen altında çözün.
PH'ı 7.4'e ayarlayın ve solüsyonu 1 L'lik son hacme kadar yapın.
Kullanmadan önce 10X'i seyreltin ve gerekirse pH'ı yeniden ayarlayın.
1L çözeltisine 5 mL Tween 20 ekleyerek yüzde 0,5 Tween 20 içeren bir PBS çözeltisi yapabilirsiniz.
PBS Tampon Yapımı İçin İpuçları
PBS çözeltisini yaptıktan sonra tamponu oda sıcaklığında saklayın.
Susuz reaktifler ikame edilebilir, ancak eklenen su moleküllerini barındırmak için her birinin uygun kütlesini yeniden hesaplamanız gerekir.
Fosfat Tamponlu Tuzlu (PBS) Kullanımları
Fosfat tamponlu salin pek çok kullanıma sahiptir çünkü çoğu hücrenin izotonik ve toksik değildir. Maddeleri seyreltmek için kullanılabilir ve genellikle hücrelerin kaplarını durulamak için kullanılır. PBS, biyomoleküllerin kurutulması için çeşitli yöntemlerde bir seyreltici olarak kullanılabilir, çünkü içindeki su molekülleri, örneğin, protein madde etrafında yapılandırılacaktır. "Kurutulur" ve katı bir yüzeye sabitlenir.
PH, hücrelerin yıkımını önlemek için sabit ve tutarlıdır.
Maddeye bağlanan ince su filmi denatürasyon veya diğer konformasyonel değişiklikleri önler. Karbonat tamponları aynı amaç için ancak daha az etkinlikle kullanılabilir.
PBS, elipsometrede protein adsorpsiyonunu ölçerken bir referans spektrumu almak için de kullanılabilir.