RNA izolasyonu için sodyum sitrat tamponu kullanılır çünkü RNA ipliklerinin baz hidrolizini en aza indirir. Bu, genomik araştırmalar sırasında veya transkripsiyon çalışmaları sırasında mRNA saflaştırmasında önemli bir adımdır.
Sitrat bazlı tamponlar ayrıca antijenler ve sabitleme ortamı arasında oluşan çapraz bağları kırdıkları için sabit doku preparatlarında antijenlerin tespit edilmesine yardımcı olabilir.
Aşağıdaki kılavuz ile, pH 6 bir sodyum sitrat tamponu yapın. Talimatlar sadece kolay değil, aynı zamanda hızlı bir şekilde yürütmek de değildir. Bu adımları tamamlamanız sadece 10 dakika sürecektir.
Tampon Yapmak İçin İki Seçenek
Sodyum sitrat tamponu oluşturmanın iki yolu vardır. İlk olarak, çalışmak için hem sitrik asit hem de konjügat baz, sodyum sitratınız olup olmadığını belirleyin. Sadece sitrik asitiniz varsa, sorun değil. Arabayı yine de yapabilirsiniz.
Diğer taraftan, hem asit hem de baz varsa, her birinin stok çözümünü yaratın. 1 litre damıtılmış su içinde 21 gram sitrik asit ve 1 litre damıtılmış su içinde 29.4 gram sodyum sitrat karıştırın.
Sadece sitrik asitiniz varsa, 1 litre damıtılmış suyun hemen altında 2.1 gram karıştırın ve bir sonraki adıma geçin.
Sitrik Asit ve Sodyum Sitrat Çözümlerinin Karıştırılması
Artık stok çözümünüzü oluşturdunuz (hem asit hem de bazınız varsa) veya asitinizi distile suya karıştırdıysanız (eğer yapmadıysanız), çözümlere odaklanabilirsiniz.
Sitrik asit çözeltisinin 82 mililitresini 18 mililitre sodyum sitrat çözeltisi ile karıştırın.
Daha sonra, karışımın toplam hacmini 1 litreden daha az bir süre damıtılmış su ile tamamlayın. Bir sonraki adımda sodyum hidroksit (NaOH) ilavesi için yeterli hacim bırakın.
PH'ın ayarlanması
Çözeltiyi manyetik bir karıştırıcı kullanarak hafifçe karıştırırken, karışımın pH değerini 6.0'a ayarlamak için 1M sodyum hidroksit kullanın. Bundan sonra, volümetrik bir şişe kullanarak çözeltinin son hacmini 1 litreye kadar damıtılmış su ile yapın.
Tamponu Yapmanız Gerekenler
Sodyum sitrat tamponu yapmak sizi çok uzun sürmeyecek, aynı zamanda pek çok malzemeye de ihtiyacınız olmayacaktır. Sitrik asit, 1M sodyum hidroksit, damıtılmış su ve kalibre edilmiş bir pH probu ile, orda olacaksınız. Sodyum sitrat kullanımı isteğe bağlıdır.
Tamponu yapmak ayrıca 1 litrelik dereceli bir silindir, 1 litrelik bir volümetrik şişe ve üç adet 1 litrelik ortam şişesine ihtiyaç duyacaktır. Son olarak, manyetik bir karıştırma çubuğuna ve manyetik bir karıştırıcıya ihtiyacınız olacak.
Bu materyallerin hiçbirine sahip değilseniz, laboratuvarı okulunuzda veya iş yerinizde kullanmayı düşünün, böylece bunları kendiniz satın almanız gerekmez. Bu materyalleri çevrimiçi olarak kolayca satın alabilir veya bölgenizdeki özel ürünler mağazasını ziyaret edebilirsiniz.