Bu Tampon DNA Hareketini Çalışmak İçin Kullanılır
Bu tampon düşük iyonik güce ve düşük tamponlama kapasitesine sahiptir. Büyük (> 20 kb) DNA parçalarının elektroforezi için uygundur ve daha uzun (> 4 saat) jel çalışma süreleri için sık sık değiştirilmesi veya yeniden sirküle edilmesi gerekir.
Bunu düşünerek, tamponun birkaç partisini düşünmek isteyebilirsiniz.
Tamponun yapılması kolay olduğundan ve basamakların hızlı bir şekilde gerçekleştirilebildiği göz önüne alındığında, bir seferde birden fazla partinin yapılmasının özellikle zaman alıcı veya çekilmesi zor olmamalıdır. Aşağıdaki talimatları kullanarak TAE arabelleğini yapmak sadece 30 dakika sürmelidir. İşte nasıl:
EDTA'nın Stok Çözümü Hazırlanması
Bir EDTA (etilendiamin tetraasetik asit) çözeltisi, önceden hazırlanır. EDTA, pH yaklaşık 8.0'a ayarlanana kadar tamamen çözeltiye gitmeyecektir. 500 mililitrelik 0.5 M EDTA'lık bir stok çözeltisi için 93.05 gram EDTA disodyum tuzu (FW = 372.2) tartılır. 400 mililitre deiyonize suda çözün ve pH'ı sodyum hidroksit (NaOH) ile ayarlayın. Çözümü 500 mililitrelik son hacme kadar doldurun.
TAE'nin Stok Çözümünü Kırpın
242 gram Tris bazı (FW = 121.14) tartılarak ve yaklaşık 750 mililitre deiyonize su içinde çözülerek bir konsantre (50x) stok TAE çözeltisi hazırlayın.
Dikkatlice 57.1 mililitre glasiyal asit ve 100 mililitre 0.5 M EDTA (pH 8.0) ekleyin. Bundan sonra, solüsyonu 1 litrelik bir son hacme ayarlayın. Bu stok çözeltisi oda sıcaklığında saklanabilir. Bu tamponun pH değeri ayarlanmamış ve yaklaşık 8.5 olmalıdır.
TAE'nin Çalışma Çözümünü Hazırlamak
1x TAE tamponunun çalışma çözeltisi, deiyonize su içinde stok çözeltisini 50x inceltilerek yapılır.
Son çözünen konsantrasyonlar 40 mM'dir. Tris-asetat ve 1 mM EDTA. Tampon şimdi bir agaroz jeli çalıştırılmasında kullanıma hazırdır.
Tampon için ihtiyacınız olan şey
TAE arabelleğini yapmak yalnızca hızlı ve basit bir talimatlar seti gerektirdiğinden, bunun için gerekli olan materyal sayısı fazla değildir. Sadece EDTA disodyum tuzu, Tris baz ve buzlu asetik asit gerekir.
Tamponun yapılması ayrıca uygun bir pH metre ve kalibrasyon standartları gerektirir. Ayrıca, 600 mililitre ve 1500 mililitre beher ya da kaplara ve ayrıca mezun silindirlere ihtiyacınız olacak. Son olarak, deiyonize suya, çubukları karıştırmaya ve plakaları karıştırmaya ihtiyacınız olacak.
Sarma
Tampon yapmayı nerede planlıyorsunuz - bir okul yerinde, iş yerinde veya eviniz gibi başka bir yerde mi? TAE arabelleği için yukarıdaki tüm malzemelere sahip olduğunuzdan emin olmaya başlamadan önce envanteri kontrol edin.
Malzemeler için ödeme yapmak zorunda kalmamanız durumunda, arabayı evinizin dışında yapmayı tercih etmeniz önerilir. Çevrimiçi ihtiyacınız olan materyalleri kolayca sipariş edebilir veya onlar için özel bir mağazayı ziyaret edebilirsiniz.