Enzim Kinetiğinin Ölçülmesi
Bir miktar arka plan olarak, enzimler , bir reaksiyonun meydana gelmesi için aktivasyon enerjisinin miktarını azaltmada katalizörler olarak hareket eden proteinlerdir. Aktivasyon enerjisi, reaksiyonların "başlatılması" için gerekli olan enerjidir, çünkü birçok reaksiyon çok hızlı gerçekleşmez (ya da termodinamik olarak mümkün ise).
Enzimler, reaktiflerin bağlandığı ve ürünleri üretmek için reaksiyona girdiği belirli bir alanda (aktif bölge olarak bilinir) spesifik reaksiyonları katalize eder. Substratlar sadece kendilerine özgü aktif bölgelere sahiptirler, böylece başka hiçbir kimyasal madde aynı siteye bağlanmaz veya reaksiyon göstermez. Bir kilit ve anahtar gibi, her bir enzim sadece belirli bir reaksiyonu (bazı istisnalar hariç) harekete geçirir.
Saflaştırma yüzdesini belirtmek için protein izolasyon yöntemlerinde spesifik aktivite kullanılır. Bu birimin, aldığınız saf enzimin ne kadarını tam olarak belirtmek için enzim satın alırken bilinmesi önemlidir.
Enzim kinetiklerini (bir enzimin bir substrat veya yüzey ile reaksiyon hızı) ölçerken, spesifik aktivite, enzim preparasyonundaki mg protein başına (katalize edilen reaksiyonlar) enzim substratı miktarı olarak tanımlanır.
Belirli bir etkinlik örneği şöyle olurdu:
- İzole edilmiş enzimin spesifik aktivitesi arıtma öncesi 150 umol / dak / mg protein ve arıtma sonrası 800 umol / dak / mg olarak ölçüldü.
Spesifik aktivite, enzim saflığının önemli bir ölçütüdür. Bir saf enzimin farklı partileri aynı değerlere sahip olmalı ve hatta bir enzim çözeltisini seyreltmeli, farklı enzim aktivitesi değerleri olsa bile, çoğu kez aynı spesifik aktivite değerlerine sahip olacaktır. Bunun nedeni, spesifik aktivitenin hesaplanmasında, pay (birim / ml) ve payda (mg / ml) eşit olarak etkilenmektedir.
Spesifik aktivite aktiviteden çok farklıdır, ancak spesifik aktivitenin hesaplanması hala etkinlik değerine bağlıdır. Bu, belirtilen spesifik aktivite değerinin de enzim birimi tanımına bağlı olacağı anlamına gelir.
Beklenenden daha düşük spesifik aktivite değerine sahip enzim partikülleri, değiştirilmiş veya katışıklarla karıştırılmış enzim molekülleri içerebilir.
Enzim Aktivitesini Etkileyen Faktörler
Bir enzimin farklı laboratuarlarda ölçüldüğünde farklı ölçülen aktivite değerlerine sahip olması mümkündür (yani, farklı birim tanımlarının kullanılmasının neden olduğu görünür farklılıklar değil, ölçülen aktivitede gerçek farklılıklar).
Bir tahlilin gerçekleştirilme şekli (enzimlerin saflığını belirlemek için test yöntemi), rapor edilen aktivite değerlerini etkileyecektir. Örneğin, enzimler genellikle 20 santigrat dereceye kıyasla 37 santigrat derece arasında daha aktiftir, bu yüzden bir analiz 21 santigrat derecede gerçekleştirilirse, değerler 32 santigrat derece sıcaklıkta yapılan analizlerden farklı olacaktır (tipik olarak Analizler 20-37 santigrat derece arasında bir sıcaklıkta gerçekleştirilir).
Böylece, enzim ünitesinin tanımı, 1 ünite (U), standart koşullar altında dakikada 1 nmol substratın reaksiyonunu katalize eden enzim miktarı olarak daha iyi ifade edilecektir.