RFLP Analizi olarak da adlandırılan bu teknik, bireylerin genetik kodlarındaki polimorfizmlerden yararlanır. Bir türün tüm üyeleri esasen aynı genetik makyaja sahip olsa da, bu hafif farklılıklar, bireyler arasında görünüm veya metabolizma gibi fenotipte varyasyonları açıklar.
RFLP: Analiz Tekniği ve Uygulamaları
RFLP analiz tekniği, belirli bir DNA bölgesini kısıtlı enzimlerle bilinen değişkenlikle kesmeyi, ardından DNA fragmanlarını agaroz jel elektroforezi ile ayırmayı ve parçaların sayısını ve nispi büyüklükleri belirlemeyi içerir.
Bir kısıtlama enzimi, kısıtlama bölgelerinde DNA'yı kesen bir protein olan bir enzimdir. Özünde, DNA örneği parçalanır ve kısıtlama enzimleri tarafından sindirilir. Elde edilen parçalar uzunluklarına göre ayrılır ve test edilen her bir birey için parça boyutlarının paterni farklılık gösterir.
Tam RFLP işlemi, prob etiketleme, DNA fragmantasyonu, elektroforez, lekeleme, hibridizasyon, yıkama ve otoradyografi gerektirir. Tespit edilen RFLP, bir otoradyografide X-ray filmi kullanılarak görselleştirilir, burada DNA fragmanları, elektroforez ile birbirlerinden ayrıldıktan sonra izlenebilir ve analiz edilebilir.
RFLP analizi için bazı uygulamalar şunlardır:
- DNA parmak izi . Adli bilimciler, suç sahnelerine toplanan kanıt örneklerine dayanarak şüphelileri belirlemek için RFLP analizini kullanabilirler.
- Babalık. RFLP ayrıca, babalık belirlenmesinde ya da ataların izinde kullanılır.
- Genetik çeşitlilik. Teknik, yaban hayatının evrimini ve göçünü araştırmak, hayvan popülasyonlarındaki üreme modellerini incelemek ve bazı hastalıkların saptanması ve teşhis edilmesinde kullanılabilir.
Genomlarda varyasyonun RFLP tespitini kullanma tekniği genom haritalaması ve genetik hastalık analizinde yaşamsal bir araçtır. Belli bir hastalık geninin yeri belli bir kromozomda aranıyorsa, araştırmacılar bir ailenin hastalıklarının DNA'sını hastalıkla analiz ederler ve RFLP alellerinde benzer kalıtım kalıpları ararlar.
Bir hastalık geni lokalize edildikten sonra, diğer aile üyeleri üzerinde RFLP analizi yapmak, mutant genlerin bir taşıyıcısını ortaya çıkarabilir veya genel hastalık riskini işaret edebilir. Adli bilimlerde ve diğer bazı alanlarda DNA analizi için daha yeni, daha sağlam tekniklerin kullanıldığı RFLP tekniğinin yaygın olarak kullanılmadığını belirtmek önemlidir.
Analizin Olumsuz Yönü
Ne yazık ki, RFLP analiz tekniği sıkıcı ve yavaştır. Büyük miktarda numune DNA'sının yanı sıra, örneklem genellikle DNA numuneleri için nispeten büyük olan çeyrek büyüklüğünde olmalıdır. Prob etiketlemeden yıkamaya ve otoradyografiye kadar olan süreç tamamlanacak ay.
İnsan Genom Projesi'nin sonuçları, RFLP'ye olan ihtiyacın yerini almıştır. Proje, insan hücrelerinde, insan genomunda bulunan DNA'nın bütün dizisinin belirlenmesine ve insan genomundaki tüm genlerin tanımlanmasına izin verdi.