Dondurarak kurutma kültürlerinin temelleri (liyofilizasyon)
Dondurularak kurutma olarak da bilinen liyofilizasyon, numuneden önce suyun çıkarılmasıyla biyolojik materyalin korunması için kullanılan bir işlemdir, bu, önce numunenin dondurulması ve daha sonra vakum altında, çok düşük sıcaklıklarda kurutulmasıdır. Liyofilize numuneler, işlenmemiş numunelerden çok daha uzun süre saklanabilir.
Neden Liyofilizasyon Kullanılır?
Liyofilizasyon veya bakteriyel kültürlerin dondurarak kurutulması, uzun süreli depolama için kültürleri stabilize ederken, numuneyi sıkı bir şekilde kurutmanın neden olabileceği zararı en aza indirir.
Birçok mikroorganizma, liyofilize edildiğinde iyi bir şekilde hayatta kalır ve uzun süre depolamadan sonra, kültür ortamında kolaylıkla yeniden hidrate edilebilir ve büyütülebilir.
Liyofilizasyon ayrıca, aşıları, kan örneklerini, saflaştırılmış proteinleri ve diğer biyolojik maddeleri korumak için biyoteknoloji ve biyomedikal endüstrilerinde kullanılmaktadır.
Bu kısa laboratuvar prosedürü, kültür koleksiyonunuzu korumak için piyasada bulunan herhangi bir dondurarak kurutucu ile kullanılabilir.
Liyofilizasyon Süreci
Liyofilizasyon işlemi aslında süblimasyon olarak adlandırılan fiziksel bir olgunun bir uygulamasıdır: bir maddenin katı maddeden gaz haline geçişi, ilk önce sıvı fazdan geçmeden. Liyofilizasyon sırasında, donmuş numunedeki su, önce çözelti çözülmeden su buharı olarak çıkarılır.
Yaygın hatalar
Liyofilizasyon söz konusu olduğunda en sık yapılan hatalardan biri, numunenizin erime noktasını bilmemekte, bu da doğru liyofilizatörü seçmeyi zorlaştırmaktadır.
Numuneler işlem sırasında eriyebilir. Diğer bir yaygın hata ise, raf tipi bir dondurucuda dondurarak kurutma yapıldığında daha soğuk olmanın daha iyi olduğunu düşünmektir. Birincil kurutma sırasında, raf sıcaklığını, numunenin ötektik sıcaklığının hemen altına ayarlamanız gerekir. Numunenin moleküllerini hareket ettirmeye yetecek kadar ısı olmalıdır, ancak erimeyi önler.
Üçüncü bir hata, numuneleriniz için yanlış ekipman kullanıyor. Dondurucu kurutucular bir grup ortamında kullanıldığından, bir tane satın almadan önce aşağıdakileri bilmeniz gerekir:
- Ne kadar nem liyofilize edilecek?
- Örnek ne (ve ötektik sıcaklık)
- Dondurarak kurutma makinesi nasıl kullanılır?
Ünite doğru kullanılmazsa, tüm örnekleri bozabilir. Bu da bizi başka bir ortak hataya getiriyor: Vakum pompasını sürdürmemek. Liyofilizasyonun çalışması için pompa mükemmel çalışma düzeninde olmalıdır. Pompayı gaz balastı ile çalıştırmadan 30 dakika önce ve sonra dondurularak kurulama işlemi pompanın ömrünü uzatacaktır. Gaz balastının açılması, dahili bileşenlerin zarar görmesini önlemek için kirletici maddeleri pompadan temizler. Çoğunlukla renk değiştirmesi ve parçacıklar için pompa yağını kontrol etmeli ve gerektiğinde yağı değiştirmelidir. Düzenli yağ değişiklikleri, donma kuru işlemi sırasında pompanın optimum vakumda çekilmesini sağlar.
Son olarak, liyofilizasyon işleminiz için yanlış dondurarak kurutma aksesuarlarına sahip olmak da büyük bir hata olabilir. Vakumun altında bir stoper örneğine mi ihtiyacınız var? Daha sonra bir durma odası gereklidir. Şişelerde donma-kurutma yapıyor musunuz? Daha sonra portları olan bir kurutma odasına sahip olduğunuzdan emin olun.
Yukarıdaki hatalardan kaçınarak, dondurarak kurutma ve kurutma işlemleriniz için daha iyi bakım sağlayabilir ve dondurarak kurutma işlemini gerçekleştirdiğinizde daha iyi örnekleri alabilirsiniz.
Referanslar
Labconco Haberleri. "Liyofilizasyon sürecinde en iyi 5 hata." http://www.labconco.com/news/top-5-lyophilization-mistakes