Bakteri Kültürü Nasıl Dondurulur (Liyofilizasyon)

Liyofilizasyon veya dondurarak kurutma, kısa bir laboratuvar prosedürüdür.

Dondurularak kurutma, aynı zamanda liyofilizasyon ya da kriyodikasyonu olarak da adlandırılır, dondurulduktan sonra (ve sonra bir vakum altına yerleştirilir) suyun bir katıdan bir sıvıya geçmeden bir katıdan bir buhara geçmesine izin veren bir üründen su çıkarma işlemidir. Buz (veya diğer donmuş çözücüler) süblimasyon işlemi boyunca bir üründen çıkarılır ve bağlanmış su molekülleri desorpsiyon işlemi ile çıkarılır.

Liyofilizasyonun Temelleri

Bakteriyel, fungal, maya veya diğer mikroorganizma kültürünü uzun süre saklamanın en iyi yollarından biri, dondurarak kurutma işleminin kullanılmasıdır. Bu kısa laboratuvar prosedürü, kültür koleksiyonunuzu koruyacak, ticari olarak satılan herhangi bir dondurarak kurutucu ile gerçekleştirilebilir. Liyofilizasyon en karmaşık ve pahalı kurutma şekli olduğundan, işlem genellikle yüksek değerde hassas, ısıya duyarlı malzemelerle sınırlıdır. Donma nedeniyle zarar görmeyen maddeler genellikle liyofilize edilebilir, böylece soğutulmuş depolama gereksizdir.

Bu işlem üç saat kadar kısa bir süre alabilir ve 24 saat boyunca, kültür büyüme süresini içermez.

Liyofilizasyonun Adım Adım Süreci

1. İlk olarak, LB veya diğer uygun besin agar plakası üzerinde mikroorganizmanın bir gece kültürü veya çim büyür.

2. Daha sonra, kapaklar (kauçuk tıpalar) üstte gevşek bir şekilde yerleştirildiğinde, steril kıvrımlı kap şişelerini önceden otoklavlayarak hazırlayın. Otoklavlamadan önce, tüpün içindeki kültürün kimliğiyle basılmış kağıt etiketleri yerleştirin. Alternatif olarak, sterilite için tasarlanmış kapaklı tüpleri kullanın.

1. Plakaya 4 mL liyofilizasyon tamponu ekleyin. Gerekirse, hücreler steril bir cam çubuk kullanılarak askıya alınabilir.

2. Kültür süspansiyonunu sterilize edilmiş şişelere hızla aktarın. Flakon başına yaklaşık 1.5 mL ekleyin. Lastik kapak ile kapatın.

3. Şişeleri bir -20 derece Celcius dondurucuya yerleştirerek şişeleri içinde kültür süspansiyonu dondurun.

1. Kültürler dondurulduktan sonra, donma-kurutucuyu açarak ve uygun sıcaklık ve vakum koşullarının stabilize olması için zaman sağlayarak hazırlayın. Bunu, kullandığınız belirli bir dondurarak kurutma makinesi markası için üreticinin talimatlarına göre yapın.

2. Dikkatlice ve aseptik olarak, flakon kapaklarını flakonların üzerine gevşek bir şekilde yerleştirin, böylece nem kurutma işlemi sırasında nem kaçabilir ve flakonları bir dondurarak kurutma odasına yerleştirin. Vakumu üreticinin talimatlarına göre bölmeye uygulayın.

3. Kültür zamanının tamamen liyofilize olmasına izin verin (kurulayın). Bu, her bir numunenin hacmine ve kaç adet örneğinize bağlı olarak birkaç saatten bir geceye kadar sürebilir.

4. Üreticinin talimatlarına göre dondurarak kurutma odasından numuneleri çıkarın ve hemen kauçuk kapaklar, daha sonra kıvrım üstleri ile flakonları kapatın.

5. Liyofilize kültür topluluğunu oda sıcaklığında saklayın.

İhtiyacınız Olan Ürünler

• Freeze-kurutucu
• Besin ya da diğer uygun agar plakaları (ve kültürü büyütmek için inkübatör)
• Cam çubuk
• Liyofilizasyon tamponu
• Lastik tıpalarla birlikte kıvrımlı üst şişeler (ve kapakların uygulanması için bir kıvırıcı)
• Dondurucu

<sub>Referans:

SP Bilimsel. Dondurularak Kurutmanın Temel Prensipleri. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>